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產品詳情
操作說明
注意事項
產品簡介
本產品RNA提取液是一種用于細胞或組織總RNA提取的試劑，利用異硫氰酸胍等物質迅速裂解細胞，使RNA釋放并萃取至苯酚中，同時內含RNase抑制劑，防止RNA降解，保持RNA的完整性。
儲存與運輸
冰袋（wet ice）運輸；4℃避光保存，有效期12個月。
組成
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Component |
數量 |
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RNA提取液 |
100 mL |
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說明書 |
1份 |
使用說明
自備LF、異丙醇、DEPC水、75%乙醇（DEPC水配制）。
1. 細胞或組織樣本裂解
貼壁細胞：去除細胞培養液，用適量預冷PBS清洗細胞，盡量將PBS吸除干凈。按照6孔板每孔加1 mL RNA提取液，12孔板每孔加0.5 mL RNA提取液的用量向孔板中加入RNA提取液，輕輕晃動使板底細胞充分接觸RNA提取液，移液槍吹打細胞，使細胞裂解，然后轉移至離心管中，室溫靜置5 min。
懸浮細胞：離心收集細胞，盡量將上清液吸除干凈，每1-10×106個細胞加入1 mLRNA提取液，移液槍吹打數次使細胞裂解，室溫靜置5 min。
組織樣本：組織剪切成小塊，放入預冷的勻漿器內，每100 mg組織加入1 mL RNA提取液，勻漿至無可見組織塊。4℃，12000 g離心10 min使組織碎片分離，轉移上清至新的離心管中。
2. RNA抽提：每1 mL RNA提取液加380 μLLF，渦旋混勻或離心管上下顛倒劇烈晃動15 s，室溫靜置3 min。
3. 離心：4℃，12000 g離心15 min，小心轉移上層無色水相至新的離心管中，每毫升提取液大約可吸取500-550 μL。
4. 沉淀RNA：向上述收集的水相提取物管中加入550 μL異丙醇，輕輕顛倒混勻數次，-20℃沉淀15 min。
5. 離心：4℃，12000 g離心10 min，在管底可見白色沉淀即為總RNA，棄上清。
6. 洗滌：加入1 mL 75%乙醇，顛倒混勻。4℃，12000 g離心5 min，棄上清，再高速短暫離心（5000 g離心3-5 s），用微量吸頭小心吸盡液體。
7. RNA溶解：將有RNA沉淀的離心管開口靜置3-5 min，待RNA略晾干后，加入20 μL DEPC水使RNA充分溶解，即可用于濃度檢測及后續實驗，不能及時進行后續實驗時需將RNA置于-70℃保存。注意不可讓RNA過分干燥，否則很難溶解，且會影響A260/280比值。
注意事項
1. 所有槍頭和離心管均需無RNA酶污染，可購買本公司無菌無酶耗材。
2. 本試劑含異硫氰酸胍和重蒸酚，避免接觸皮膚或吸入。
3. 操作時請穿實驗服，并佩戴一次性手套。
產品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
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